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介紹一下熒光定量PCR的顯色和比色分析
發布時間:2021-12-27 點擊次數:267次
  熒光定量PCR就是實時檢測PCR每個循環擴增產物相對的熒光信號,來實現對起始模板進行定量及定性的分析。熒光定量PCR是通過多擴增反應中每一個循環產物的熒光信號進行實時監測,並分析指數期的擴增情況來實現對起始模板的定量分析。該技術使用的熒光來源包括熒光探針和熒光染料。前者是利用與靶序列特異雜交的探針來指示擴增產物的增加,因此特異性更高;而後者則能結合所有的雙鏈DNA,因此不必因模板的不同而特別定製,通用性強,但需要保證擴增產物的特異性。
 
  下麵為您介紹熒光定量PCR的顯色和比色分析:
 
  顯色是elisa中的溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內,陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助於加速顯色進行。在定量測定中,加入底物後的反應溫度和時間應按規定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控製,有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色狀況適當縮短或延長反應時間,及時判斷。
 
  比色前應先用潔淨的吸水紙拭幹板底附著的液體,然後將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置於標準96孔的座架中,才可進行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪淨,這樣,此板就可完全平妥坐入座架中。
 
  比色時應先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經任何反應僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況。其後可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然後進行計算。
 
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