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免疫沉澱是專門研究蛋白質相互作用的先進技術
發布時間:2022-03-28 點擊次數:149次
  免疫沉澱是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合後,再與ProteinA/G偶聯的agarose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白複合物,沉澱經過洗滌後,重懸於電泳上樣緩衝液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
 
  原理:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在ArgaroseBeads上的蛋白質A的抗體免疫沉澱A蛋白,那麽與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。
 
  這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,得到的結果可信度高。這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
 
  免疫沉澱技術,是一項專門研究蛋白質相互作用的先進技術,不過其現在也廣泛的應用於基因領域的研究,比如轉錄調節蛋白的作用、靶向蛋白受體的篩選、基因蛋白產物表達的研究、RNA參與遺傳物Chemicalbook質複製的方式以及DNA修飾的機製等等。該技術擁有靈敏度高、準確度高、特異性強的優點,所以在專一性結合物質的檢測和篩選中得到的很好的應用,也成為相應實驗中減少實驗程序並縮短實驗時間的理想方法之一。

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